Что такое ПЦР?

Полимеразная цепная реакция состоит в экспоненциальном росте (удвоении) заданного фрагмента ДНК. Суть метода заключается в многократном копировании (амплификации) введенного в реакцию фрагмента ДНК. В реакции учитываются естественные свойства двойной цепи ДНК к потере связей (расплетание цепи) и восстановлении (достраивание цепи на основе заданного фрагмента) при определенных температурных режимах и составе смеси для реакции. Полученные фрагменты можно регистрировать при окрашивании различными красителями - интеркалирующими, люминесцентными и др. В этом случае есть возможность как оценить присутствие либо отсутствие фрагмента в реакционной смеси (ответ да или нет, качественная оценка реакции), так и определить количество ДНК в первоначальной смеси по критериям калибровочных кривых. Калибровочные кривые строят по стандартам с заданными данными и проводят проверку качества при помощи контрольных образцов. Контрольные образцы в ПЦР применяют нескольких типов:
- ВКО - внутренний контрольный образец. Этот вид контрольного образца является "встроенным" в реакцию и позволяет оценить ложно отрицательные реакции, потерю образца в процессе выделения ДНК или ее ингибирование.
- ОКО - отрицательный контрольный образец, позволяет оценить ложно положительные реакции, контаминацию реакции внешними загрязняющими ДНК, некачественное выделение ДНК. При наличии выявленной контаминации вся партия подлежит повторной обработке, а в некоторых случаях и проводится деконтаминация всей лаборатории или лабораторного блока.
- ПКО - положительный контрольный образец, позволяет оценить и выявить ложноотрицательные реакции при сбое ферментативных систем (отсутствие полимеразы, ингибирование полимеразы, ее распад, инактивирование, например при смещение pH, облучении УФО и др,) ПКО может быть с заданными параметрами и таким образом служит критерием точности выполнения пробоподготовки и работы аппаратуры.